| Resumen |
- Expresión Diferencial de ARNm Inducidos por el Substrato Nitrogenado Durante la Idiofase de Gibberella fujikuroi Las giberelinas son un grupo importante de fitohormonas, entre ellas, el ácido giberélico (GA3) ha sido empleado en la agricultura, a partir de preparaciones comerciales de la fermentación del hongo Gibberella fujikuroi. La síntesis de GA3 se ha estudiado en plantas; sin embargo, los mecanismos moleculares durante su biosíntesis en hongos de interés biotecnológico no se encuentra totalmente entendida. El establecimiento en la biosíntesis de GA3 ocurre bajo condiciones limítrofes de nitrógeno, donde la glutamina es el compuesto activador del metabolismo secundario. Al cultivar el hongo G. fujikuroi bajo condiciones inductoras y represoras de la idiofase, mediante el control del substrato nitrogenado, se podrían determinar los genes que se expresan diferencialmente, a fin de contribuir en el endentimiento a nivel molecular de la síntesis de GA3 en hongos. El micelio de G. fujikuroi ATCC 12616, se sometió a dos concentraciones iniciales de nitrógeno, cultivo inductor (Cl) y represor (CR), y mediante el seguimiento de las variables: pH, consumo de nitrógeno, y producción del GA3. Se encontró el período inicial del metabolismo secundario del hongo en Cl. Alrededor de dicho período se aplicó el despliegue diferencial del ARNm al micelio proveniente de los cultivos y se determinaron los ADNc participantes. En ambos cultivos se observaron valores de pH estables durante las primeras 12 horas de cultivo, enseguida disminuyeron. El consumo de nitrógeno fue significativamente diferente respecto al tiempo de cultivo; en el micelio de CR los niveles llegaron a 7. 6 mM de nitrógeno a las 21 horas, mientras que en Cl fue en 2.1 mM a las 12 horas de cultivo. La biosíntesis de GA3 se observó en niveles significativos, a partir de las 15 horas en CR, y a partir de las 9 horas en Cl. Se estableció como período inicial de la idiofase a las 12 horas en Cl. Del despliegue diferencial se encontraron cuatro fragmentos (GfDl , GfD2, Gfll , y Gfl2), los cuales son resultado de ADNc inducidos al nivel de transcripción.Al observarse una población mayor de transcritos del cultivo inductor, se infiere un incremento en la síntesis de biomoléculas relacionadas a la producción del idiolito. En estas condiciones, las células responden activando mecanismos al nivel de genes y/o la actividad enzimática, al igual como sucede en otros ascomicetos Se identificaron fragmentos específicos de ADNc en la situación de inducción durante la presente investigación, aunque son productos de la expresión diferencial, estos genes aún requieren de investigaciones futuras. Esto hará posible su identificación y señalará su participación en el metabolismo secundario. La elucidación de la secuencia facilitará el desarrollo de sondas de ARNm y de anticuerpos, las cuales proveerán la oportunidad de cuantificar las reacciones inducidas por el nitrógeno, mostrarán su distribución intracelular y ayudarán a definir las rutas bioquímicas exactas dentro del micelio del hongo y de la planta. Palabras claves: Ácido gibérelico, ADNc, expresión genética, metabolismo secundario, regulación por nitrógeno, RT-PCR. |
Tesis de posgrado