| Resumen |
- Los canales KATP del páncreas están formados por un canal con rectificación entrante (Kir6.2) y un receptor con alta afinidad a las sulfonilureas (SUR1). Estos canales tienen una función primordial en la regulación de la secreción de insulina. Defectos genéticos en el receptor SUR1 y el canal Kir6.2 producen una enfermedad conocida como hipoglicemia hiperinsulinémica persistente de la infancia (PHHI), que se caracteriza por un incremento en la secreción de insulina en presencia de concentración bajas de glucosa. Este estudio presenta un análisis funcional de 2 nuevas mutaciones (?S1387 y D310N) en el receptor SUR1, asociadas con la PHHI. Plásmidos que contenían las mutaciones D310N y ?S1387, fueron subclonados en el vector pECE y cotransfectadas con el canal Kir6.2 silvestre, más la GFP, en células COSm6. Registros de la corriente unitaria utilizando la técnica de patch clamp en la configuración de inside-out fueron realizados dos días después de la transfección. Los resultados obtenidos muestran que ambos mutantes se insertan en la membrana y producen canales funcionales sensibles a ATP en presencia y ausencia de Mg2+. Las constantes de disociación (KD) obtenidas de la curva dosis-respuesta fueron de 22, 25 y 42 ?M en presencia de Mg2+ y 24, 22 y 16 ?M en ausencia de Mg2+ para el canal silvestre y los mutados Kir6.2/SUR1-?S1387 y Kir6.2/SUR1-D310N respectivamente. Para explorar la causa de la reducción en la sensibilidad al ATP en presencia de magnesio para la mutante D310N se probó el AMP-PNP, un análogo no hidrolizable de ATP. La KD para el canal silvestre y el mutado D310N fueron similares (19 y 20 ?M respectivamente). Además, el mutante ?S1387 no respondió a la estimulación con ADP (0.5 mM), mientras que la mutante D310N presentó una respuesta atípica al ADP en presencia de Mg2+. Ambos canales mutados mostraron un aumento en su actividad en respuesta al diazóxido (0.1 mM), un fármaco hipoglucemiante que abre los canales KATP pancreáticos y detienen la secreción de insulina, y es el principal fármaco utilizado en el tratamiento de pacientes con la PHHI. Nuestros resultados contribuyen al conocimiento de los mecanismos que regulan al canal KATP pancreático y su alteración en condiciones fisiopatológicas. |
Tesis de posgrado