| Resumen |
- En el presente trabajo encontramos que colina activa una corriente de potasio con activación tiempo- y voltaje-dependiente en diferentes especies de mamífero. Hasta ahora dos hipótesis han sido planteadas para la identificación de esta corriente. Shi et al. (1999) han sugerido que colina y 4-AP activan rectificadores tardíos diferentes a través de receptores muscarínicos diferentes, M3 y M4, respectivamente. Una propuesta alternativa es que, 4-AP, colina, TMA, betanecol, y otros agonistas muscarínicos activan la corriente IK-ACh en una forma voltaje-dependiente. Presentamos evidencias de que la corriente activada por colina no posee características típicas de las corrientes rectificadoras tardías, el curso temporal de la activación es dependiente de la concentración del agonista, la desactivación de la corriente es voltaje-independiente y no es bloqueada por dofetilida e indapamida, bloqueadores específicos de IKr e IKs, respectivamente. La corriente activada por colina es bloqueada por tertiapina, un bloqueador específico de IK-ACh. El tratamiento de los miocitos con PTX previene la activación de la corriente por colina, indicando que una proteína Gi/o esta involucrada en el proceso de activación de la corriente. Esto descarta la participación de receptores M3, los cuales se acoplan a proteínas Gq, insensibles a PTX. En trabajos previos utilizando registro de canal unitario hemos encontrado que el canal activado por 4-AP y colina tiene una conductancia y cinética similar al de IK-ACh. La participación de otros subtipos de receptores muscarínicos además del receptor M2 no es clara ya que los antagonistas supuestamente específicos para receptores M3 y M4 no lo son en esta preparación de miocitos auriculares de gato. Hemos mostrado evidencias de que la modulación por voltaje de la activación de IK-ACh podría estar a nivel del receptor, y que cuando la interacción del agonista con el receptor únicamente involucra la interacción del grupo amonio cuaternario del agonista con el sitio aniónico del receptor, la interacción es voltaje-dependiente. In the present study we found that choline activates a voltage- and time-dependent potassium current in different mammalian species. To date, two hypothesis have been established to identify this current. Shi et al. (1999) have suggested that choline and 4-AP activate different delayed rectifiers through different muscarinic receptors, M3 and M4, respectively. An alternative hypothesis proposed that 4-AP, choline, TMA, bethanechol and other muscarinic agonists activate the IK-ACh in a voltage-dependent manner. We show evidence that the choline activated current do not have the characteristics of a delayed rectifier current, the activation kinetic is agonist concentration-dependent, the deactivation kinetic is voltage-independent and the current is not blocked by the specific blockers of IKr and IKs, dofetilide and indapamide. Tertiapin, a specific blocker of IK-ACh, blocks the choline activated current. The activation of the choline-induced current is prevented by pretreatment with PTX, this indicates that a Gi/o protein is involved in the process of the current activation. This evidence excludes the participation of M3 receptors, which are coupled to a PTX-insensitive Gq protein. In previous studies, we found that 4-AP and choline activate a single channel with conductance, mean open time and inward rectification properties, similar to IK-ACh. It is not clear the participation of other muscarinic receptor subtypes other than M2 receptors because there are not any of the supposed specific mAChR antagonists for M3 and M4 receptors, in cat atrial myocytes. We have shown evidences that the voltage modulation IK-ACh activation could be at the receptor level, and when the agonist interacts with the receptor it only involves the interaction of the charged amino head group present in the agonist with the receptor anionic site, this interaction is voltage-dependent. |
Tesis de posgrado