Resumen |
- El presente estudio es el primer reporte sobre la inducción del enraizamiento in vitro de Agave salmiana Otto, utilizando Agrobacterium rhizogenes. Para ello se trabajó con diferentes concentraciones de bacterianas y de acetosiringona, así como también se evaluaron diferentes sitios de inoculación en hojas, tallo y raíz. El tiempo de incubación en la oscuridad fue de 6 días. Las raíces adventicias transformadas se presentaron a los 25 días después de la inoculación. El mejor tratamiento resulto de la inoculación en tallo con: 1x108 bacterias ml-1 y 100 m de acetosiringona, este tratamiento obtuvo un 57.5 porciento para la inducción de raíces transformadas en los puntos inoculados. Para verificar la actividad y presencia de los genes foráneos, en las raíces transformadas de Agave salmiana, se realizó de la siguiente manera: A) tinción histoquímica, para la actividad de GUS la cual fue determinada en un 80 porciento de las raíces probadas, y B) mediante el análisis molecular a través de PCR, se verificó la presencia del gene nptII y del gen rol B (ambos estuvieron presentes en un 60 porciento de las raíces probadas). En lo que respecta a la colonización micorrízica este es el primer reporte, en donde se determinó un 85 porciento de colonización en las raíces silvestres de Agave salmiana, por parte de una micorriza arbuscular nativa. Así como también es el primer reporte sobre la colonización de las raíces transformadas de Agave por Glomus intraradices Schenck y Smith. El resultado del cultivo monoxénico fue el siguiente: la espora madre germinó a los 5 días, la colonización de las raíces transformadas fue de un 70 porciento . Enseguida se procedió a la recuperación de las esporas hijas, de las cuales se obtuvieron en promedio 300 esporas hijas por caja petri, después de 6 meses de iniciada la inoculación. The current work is the first report in vitro on root induction of Agave salmiana Otto, using Agrobacterium rhizogenes. Several concentrations of bacteria and acetosyringone were used, as well as different sites of inoculation were tested on leaves, shaft and root. The time of incubation in the darkness was 6 days. The transformed adventitious roots was presented 25 days after inoculation. The best treatment resulted from inoculation of shaft with: 1x108 bacteria ml-1 and 100 m acetosyringone and resulted, in this treatment 57.5 percent to the inoculated points producer transformed roots induction. The activity and presence of the foreign genes in the transformed roots of Agave salmiana, was verified as follows: A) histochemical staining for GUS activity was determined in 80 percent of the tested root, and B) molecular analysis via PCR was made to verify the presence of nptII gene and rol B gene (both were present in a 60 percent of the tested root). In what concerns to mycorrhizal colonization this is the first report, the 85 percent of the wild roots of Agave salmiana were colonized by native arbuscular mycorrhiza. This is also the first report, of the colonization of the transformed roots of Agave with Glomus intraradices Schenck and Smith. The result of the monoxenic culture was as follows: the mother spore germinated 5 days, the colonization of the transformed roots was 70 percent. Then we proceeded to the recovery of the daughter spores, in which we obtained average 300 daughter spores per petri dish, 6 months after inoculation started. |